АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук.
ВЫВОДЫ
1. Усовершенствована методология ветеринарно-санитарного контроля сырья и продуктов животного происхождения, содержащих остаточные количества антибиотиков, и предложены пути их технологической обработки, позволяющие снизить количество антибиотиков до безопасного уровня.
2. Установлено, что сырье и продукты животного происхождения импортного и отечественного производства, отобранные на предприятиях, в лабораториях и на рынках г. Москвы, могут содержать остаточные количества антибиотиков.
Частота загрязнения отечественных образцов мяса птицы составила 12,5%, импортных — 20 %, субпродуктов птицы отечественного производства — 42,5 %, импортного — 45,5 %, мяса свиней соответственно – 15 и 17,5 %. Отечественная говядина содержала антибиотики в 4 % случаев, импортная — в 9,3 %. Отечественный сыр твердый содержал антибиотики в 25 % случаев, импортный — в 100 % случаев.
3. Из 2075 исследованных проб сырья и животноводческой продукции в 391 (18,8 %) были обнаружены антибиотики, из них тетрациклин — в 344 пробах (16,6 % всех исследованных образцов), левомицетин – в 21 пробе (1,0 %), стрептомицин – в 17 пробах (0,8 %), пенициллин – в 7 пробах (0,3 %), гризин – в 2 пробах (0,01 %).
В 88 % случаев выявления антибиотиков был обнаружен тетрациклин, в 5,4 % — левомицетин, в 4,3 % — стрептомицин, в 1,8 % — пенициллин, в 0,5 % — гризин.
4. Определена чувствительность бактериальных штаммов B.subtilis L2, B.mycoides 537, B.pumilus NCTC8241, S.aureus 209-P, S.aureus ATCC 6538, M.luteus ATCC 9341, Str.thermophilus, Str.faecium к следующим антибиотикам: бензилпенициллину, тетрациклину, неомицину, гентамицину, спектиномицину, левомицетину, линкомицину, гризину и бацитрацину. Установлено, что штаммы B.subtilis L2 и M.luteus ATCC 9341 являются чувствительными к наибольшему количеству исследованных антибиотиков.
5. Модифицирована микробиологическая методика с использованием бактериальных штаммов B.subtilis L2 и M.luteus ATCC 9341. С помощью штамма B.subtilis L2 по диаметру зоны задержки роста вокруг бумажного диска, пропитанного экстрактом мышечной ткани или молока, возможно определить в субстрате наличие тетрациклина, неомицина, гентамицина, стрептомицина, линкомицина, гризина, бензилпенициллина. С помощью штамма M.luteus ATCC 9341 – наличие левомицетина и бацитрацина.
Установлено, что оптимальной средой для культивирования штаммов B.subtilis L2 и M.luteus ATCC 9341 является перевар Хоттингера с содержанием 120 –140 мг% аминного азота с добавлением 1% глюкозы, рН среды 7,2 – 7,4. Плотность инокулюма для получения сплошного газона должна составлять 1 млрд. бактериальных клеток в 1 мл культуральной жидкости. Величина инокулюма – 1 мл на одну чашку Петри. Температура культивирования – 35 – 37(С.
6. Усовершенствована пробоподготовка мышечной ткани и молока при определении в них антибиотиков, которая заключается в гомогенизации пробы, экстрагировании антибиотика ацетоном в соотношении 1:1 с дальнейшим центрифугированием экстракта при 3000 об/мин. в течение 10 мин. Она обеспечивает максимальное извлечение антибиотиков, сопоставимое с существующим (МУК 4.1.1912-04 и МУ 3049-84), снижает затраты времени и средств.
7. Показано, что модифицированный нами микробиологический метод и метод ВЭЖХ позволяют определять антибиотик в диапазоне 0,01 — 100 мг/кг. Коэффициент корреляции результатов определения концентрации левомицетина и тетрациклина в мышечной ткани и молоке модифицированным микробиологическим методом и методом ВЭЖХ составил 0,80. Иммунохимический метод твердофазного ИФА позволяет определять антибиотик в диапазоне 0,0001 — 100 мг/кг. Коэффициент корреляции результатов определения концентрации левомицетина и тетрациклина в мышечной ткани и молоке модифицированным микробиологическим методом и методом ИФА составил 0,92. Более чувствительный метод ИФА может использоваться для выявления проб с низким содержанием антибиотиков.
8. Установлено, что микробиологическая тест-система Дельвотест-R чувствительна к присутствию в молоке пенициллина, неомицина, гентамицина, тетрациклина, эритромицина в количествах, регламентированных СанПиН 2.3.2.1078-01. В присутствии линкомицина, рифамицина, стрептомицина олеандомицина, полимиксина, левомицетина цвет тест-системы изменяется при концентрации активного антибиотика выше МДУ. Чтобы учесть следовые количества таких антибиотиков в молоке, результаты, полученные с помощью тест-системы Дельвотест-R, должны подтверждаться дополнительными методами.
9. Проварка говядины и свинины кусками массой не более 2 кг в течение 3 ч в открытых котлах при достижении температуры внутри куска не менее 80(С, а тушек птицы — 1 ч позволяет снизить исходное количество антибиотиков на 85 – 90 %. 15 – 20 % исходного количества антибиотиков разрушается в процесе варки, около 70 % переходит в бульон.
При изготовлении вареных колбас из сырья, содержащего антибиотики в количествах, превышающих предельно допустимые, в готовом изделии остается от 89 до 93 % исходного количества антибиотика. Термохимический способ изготовления колбас не приводит к заметному снижению количества антибиотиков.
Промывание мяса приводит к снижению содержания антибиотика на 12 – 25 % в зависимости от способа его введения. После замораживания количество антибиотика снижается на 21 – 23 %.
10. На основании проведенных исследований мы предлагаем следующую ветеринарно-санитарную оценку мяса: при обнаружении остаточных количеств антибиотиков, превышающих максимально допустимый уровнь в 1,5 – 2 раза, мясо можно обработать промыванием с последующей замораживанием. При более высоком содержаниии антибиотиков рекомендутся проварка мяса при общепринятых технологических режимах с последующим изготовлением низкосортных вареных колбас.
11. При использовании режимов длительной пастеризации молока (63 — 65(С в течение 30 мин) количество антибиотиков снижается на 14 – 26 % в зависимости от вида антибиотика, при использовании режимов кратковременной (75 — 80(С в течение 15 – 20 с) и мгновенной (80 — 90(С без выдержки) пастеризации молока количество антибиотиков снижается на 0 – 20 %. При кипячении происходит снижение количества антибиотиков на 5 – 10 %, при стерилизации – на 0 – 8 %, при сквашивании в среднем на 10 %. На основании проведенных исследований мы предлагаем следующую ветеринарно-санитарную оценку молока: при обнаружении остаточных количеств антибиотиков молоко должно подвергаться разбавлению с последующей пастеризацией или может использоваться в качестве дополнительного кормового средства.
12. Усовершенствованный ветеринарно-санитарный контроль за содержанием остаточных количеств антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения призван способствовать получению потребителем животноводческой продукции, отвечающей требованиям стандартов качества и безопасности по содержанию антибиотических препаратов.
«Московский государственный университет прикладной биотехнологии», 2008
